引言

朊病毒是一类能引发人类和动物脑部蛋白质异常折叠的可传播病原体，其感染可导致严重的脑损伤，甚至致命。这类神经退行性疾病的实例包括羊瘙痒症、疯牛病（牛海绵状脑病）和克雅二氏病。以往，研究朊病毒需要长达1至6个月的生物测定，对受感染动物进行漫长的观察，这不仅费时，也增加了饲养感染动物的成本。在这种背景下，位于蒙大拿州汉密尔顿的落基山实验室研发了一种新的朊病毒接种测定法，即实时震荡诱导转化测定法（RT-QuIC），能够快速、定量地测定受感染样本中的朊病毒水平。与传统方法相比，该检测法速度更快、通量更高，测定可在短短20小时内完成，其灵敏度甚至可以比拟或超越全动物模型。

新葡萄8883官网AMG的FLUOstarOmega是唯一具备长时间震荡和培养微孔板功能的酶标仪，这得益于其坚固的“德国制造”结构。在RT-QuIC测试中，样本每隔15分钟进行一次测量，持续20至68小时，交替震荡1分钟和静置1分钟。为此，我们开发了一个软件脚本，用于控制激活测定所需的振荡和静置时间。

检测原理

RT-QuIC检测法用于估算朊病毒接种的相对数量。该方法通过对样本进行连续稀释，统计估算接种剂量（SD）。在检测过程中，极少量的传染性朊病毒会添加至正常朊病毒蛋白中，促使其发生错误折叠。测定方法是通过测量样本稀释度并确定接种活性损失（SD50），即终点稀释度来进行量化。实验全程需在恒定的42°C下进行，我们编写了两种测试运行协议：一是振荡板一分钟后静置一分钟，二是每15分钟进行一次荧光终点测量。

使用荧光染料硫黄素T（ThT）作为朊病毒接种的标记，ThT与聚合反应中的朊病毒蛋白结合，从而导致荧光强度随时间增加。

仪器设置

FLUOstarOmega的荧光终点-底部读数设置包括激励滤光片450纳米，排放滤光片480纳米，闪光灯200收益2000，震荡700RPM双轨道。使用斯皮尔曼-凯伯（Spearman-Kärber）分析法，用于估算每克组织中50%出现ThT阳性反应的播种剂量或稀释倍数（SD50/g）。该分析需确保选定稀释系列中至少存在一个稀释度ThT阳性率为100%，以及一个稀释度ThT阳性率为0%。

结果与讨论

经过20至68小时的测量，数据来源于8个重复孔的相对荧光单位平均值。FLUOstarOmega酶标仪不仅支持线性振荡，还具备独特的双轨道振荡功能，确保整个测量过程中的温度维持在42°C。Omega系列的高品质设计和坚固构造，使得研究人员能够进行连续数天的测量，而不会中断震荡或产生温度波动。数据被持续收集，并输出到新葡萄8883官网AMG的数据分析软件（MARS）和Excel中。

总的来说，RT-QuIC检测法与生物测定结果高度相关，表明该方法比传统的生物检测方法更快且灵敏。研究表明，接种后仅10天的动物样本也可通过此方法进行检测，为疾病监测提供了更高效的工具。

结论

使用新葡萄8883官网AMG的多功能酶标仪和RT-QuIC检测法，可以在更短时间内、高效率地测量朊病毒接种。这种方法适用于仓鼠、绵羊的痒病、鹿的慢性消耗性疾病、克雅氏病（CJD）和牛海绵状脑病（BSE）等多种经证实可以检测的传染性海绵状脑病。通过FLUOstarOmega，研究人员能够享受到持续高速震荡测量的优势，确保检测过程的高效性与灵敏度。有关RT-QuIC检测的更多信息，请关注新葡萄8883官网AMG提供的相关科学讲座。

欢迎关注新葡萄8883官网AMG官方微信（微信公众号：Bio-Gene），回复：BMG，获取更多相关视频。长按/扫描以下二维码即可关注公众号。

广州进科驰安科技有限公司 Bio-Gene Technology Ltd 热线：17620093784

www.bio-gene.com.cn marketing@bio-gene.com.cn