新葡萄8883官网AMG提供了一种高效的提取大鼠原代脂肪间充质干细胞的方法,特别适用于SD大鼠。本实验的主要步骤包括材料准备、操作过程及注意事项,旨在确保细胞的高品质和无污染。
1. 实验材料准备
选择2周龄、体重约200克的SD大鼠作为实验对象。同时,准备灭菌器械,包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪和磁珠等。此外,需准备5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板和图钉以便固定大鼠。使用75%乙醇进行消毒,确保操作环境的无菌。此外,备好预冷的无菌PBS水、无菌离心管(15mL和50mL)、细胞筛及无菌培养瓶。培养基需为SD大鼠脂肪间质干细胞完全培养基。
2. 实验操作
在超净工作台上,将所有器械和材料进行紫外消毒,时长为30分钟。随后配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶并进行过滤除菌。在对SD大鼠进行颈部脱离后,将其浸泡在75%酒精中2-3分钟,然后固定在泡沫板上。小心剪开大鼠腹股沟区皮肤,暴露出脂肪组织。必要时,仔细剪取脂肪组织并放入PBS,避免剪到血管。之后,用PBS清洗脂肪组织,剔除多余的血管和淋巴结,将脂肪组织剪碎至2mm×2mm的适宜大小,并加入胶原酶,在37℃下进行消化,期间每5分钟震荡一次或持续搅拌。
消化完成后,将细胞悬液转移至离心管中进行离心,弃去上层的脂滴泡沫和上清液,并用培养基重新悬浮沉淀。将细胞悬液过滤,再次离心后弃上清,用培养基重悬,并将其接种到培养瓶中。最后,将培养瓶放入37℃、含有5% CO2的培养箱中培养,以确保细胞生长的最佳条件。
3. 注意事项
在整个实验过程中,必须保持无菌操作,避免细胞污染。脂肪组织的剪取和清洗过程应尽量细致,以防损伤细胞或引入杂质。消化过程的时间和温度需严格控制,避免过度消化造成细胞损伤。离心和过滤过程中,务必轻柔操作,以防细胞损失或破裂。通过新葡萄8883官网AMG的专业技术优化这一过程,可为细胞研究提供更强的保障。