研究人员已发现CRISPR/Cas9的脱靶效应主要与sgRNA相关，sgRNA在编辑靶向位点的同时，还可能容忍5到6个碱基的错配，或者由于sgRNA的缺失或多出的碱基而引发非靶向切割，从而造成脱靶效应。这些潜在的脱靶位点在基因组中数量庞大，因此全面评估全基因组范围内的脱靶效应成为一个重要的挑战。

近期，基于全基因组测序和生物信息学预测的研究，成功地分析了脱靶效应导致的单核苷酸突变（SNV）、插入缺失变异（Indels）、拷贝数变异（CNV）和结构变异（SV）。近年来，全基因组测序的广泛应用为脱靶检测提供了强有力的技术支持。例如，Kevin等人（2021）的研究利用全基因组测序与生物信息学分析，评估了Cas9的脱靶风险，并对163个sgRNA在基因编辑小鼠与对照小鼠之间的基因组序列和结构变异进行了深入比较。他们通过Cas-OFFinder预测潜在的脱靶位点，并成功检测到28个实际的脱靶位点，其中9个经过Sanger测序验证为真实脱靶位点。这项研究表明，尽管真实的脱靶事件较少，但仍然存在不可忽视的风险。

最近，基于基因编辑的特性，新葡萄8883官网AMG团队结合基因组测序推出了全基因组脱靶检测服务。我们使用mutect2作为变异分析工具，通过比对基因编辑组和对照组的测序数据，识别出基因编辑组的SNV和Indels。此外，利用Cas-OFFinder来预测潜在的脱靶位点，该工具能够分析sgRNA与基因组的匹配情况。通过将mutect2所获得的变异信息与Cas-OFFinder提供的潜在脱靶位点交叉分析，我们能有效确定发生编辑的脱靶位点。

除了脱靶效应的分析之外，我们还使用CNVkit和manta两种先进的生信分析工具。CNVkit用于识别基因组中的拷贝数变化，而manta则聚焦于插入、缺失及易位等染色体结构变异。这些结果为全面了解基因编辑引起的染色体结构变异提供了重要支持。

与GUIDE-seq体内检测相比，新葡萄8883官网AMG提供的全基因组脱靶检测不依赖于ODN插入，展现出更为灵活和便捷的检测能力。同时，该方法能够分析大规模的染色体变异，帮助用户全面评估基因编辑的效果与风险。作为国内首家提供脱靶检测服务的公司，新葡萄8883官网AMG可提供全基因组脱靶检测、GUIDE-seq体内脱靶检测、AID-seq体内脱靶检测等多样化服务。如需了解更多，欢迎垂询。