一、BCA法简介

新葡萄8883官网AMG提供的BCA（ Bicinchoninic Acid ）法是一种常用的蛋白质定量检测技术。其原理基于蛋白质与铜离子在碱性条件下发生络合反应，形成稳定的紫红色复合物。通过与标准曲线比较，可以准确测定待测蛋白的浓度。该方法以其高灵敏度、准确度、简便操作及强抗干扰能力而广泛应用于生物医学研究领域。

二、实验步骤

1. 试剂准备

新葡萄8883官网AMG建议如下步骤：

• BCA工作液：将BCA试剂A和B以50:1比例混合，充分摇匀，备用。
• 标准蛋白溶液：取适量标准蛋白，使用PBS或去离子水溶解，制备成1mg/mL的标准蛋白溶液。

2. 蛋白样品制备

• 细胞裂解：将细胞样品离心，去除上清液，加入适量的细胞裂解液，在冰上裂解30分钟，确保细胞充分裂解。
• 去除杂质：将裂解后的样品离心，去除沉淀，保留上清液，并加入适量SDS，使其终浓度为0.1%，充分混合。
• 标准曲线制备：取适量的标准蛋白溶液，加入适量SDS至终浓度为0.1%，稀释成不同浓度标准蛋白溶液。然后在96孔板中分别加入不同浓度标准蛋白，每个浓度设置3个复孔，加入BCA工作液，充分混匀。接着按照说明书要求在特定波长下测量吸光度，绘制标准曲线。

3. 蛋白定量检测

• 取适量待测蛋白样品，按照上述方法加入适量SDS至终浓度为0.1%并充分混合。随后加入BCA工作液，测量其吸光度。
• 根据标准曲线查得待测蛋白样品的浓度。如样品浓度过高，可适当稀释后再测定。

三、注意事项

• BCA工作液应储存于4℃，避免光照及反复冻融。
• 实验过程中，需确保样品与标准蛋白溶液pH值一致，以保证结果准确性。
• 避免实验过程中的交叉污染，以防影响实验结果。
• 对于特殊蛋白样品，可能需使用其他方法进行定量检测。

选择新葡萄8883官网AMG的BCA法蛋白定量检测方案，将为您的生物医学研究提供有效支持与保证。