支原体的概念与污染影响

支原体（Mycoplasma），又称霉形体，是当前已知体积最小、构造最简单的无细胞壁原核生物，直径在0.1~0.3μm之间，它们能够通过滤膜且呈现高度多形性，常见于哺乳动物细胞培养中，且难以检测。由于其能够形成丝状和分枝形态，因此被称为支原体。

支原体是细菌中体型最小的一种微生物，属于柔膜菌门和柔膜菌纲，进一步分为不同的目、科和属。在研究中，支原体目和支原体科被广泛关注，主要包括支原体属和脲原体属。支原体污染对细胞培养造成了多方面的不良影响，已经成为细胞培养时的一个严峻问题，估计常规细胞培养中支原体污染率在15%到35%之间，严重干扰实验结果的可信度。

细胞培养中的95%支原体污染主要由莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体、口腔支原体、发酵支原体、人型支原体及猪鼻支原体引起。支原体在培养基上形成的菌落呈现“煎鸡蛋”的形状，适宜支原体生长的细胞培养上清和细胞膜可使其寄生于细胞表面，并穿透宿主细胞膜。

支原体污染的主要来源包括细胞培养液或其成分（如培养基原料、血清及其他试剂）、实验室操作人员、细胞培养箱、液氮培养箱、空气中的微粒及气溶胶、抗生素的过度使用、密封不当的细胞培养物，以及受污染的细胞等。

与此同时，这些污染带来的危害包括：造成细胞制品或基于细胞的产品在下游纯化过程中因未能有效去除支原体而废弃、污染所有接触的设施和中间或最终产品、导致其他正常细胞受到污染、影响重要细胞或病毒种子库、使实验室整体环境污染而需停止生产或实验，并加剧抗药性，使得支原体更难被去除，进一步扩大污染范围，威胁到实验室中的其他细胞培养物。

因此，为保障科学研究工作的正常进行，定期进行支原体检测和去除，确保细胞培养体系内不存在支原体极为重要。在生物制药和细胞研究中，支原体污染是一个显著问题，因为它可能影响实验结果和产品质量。因此，支原体检测对于确保细胞培养物和生物制品的安全性和可靠性至关重要。

目前常用的支原体检测方法包括培养法、PCR（聚合酶链式反应）法、荧光染色法、ELISA（酶联免疫吸附试验）法、qPCR（实时定量PCR）及代谢活性测定（如ATP酶法）等。各种支原体检测方法的优缺点如下：

在选择合适的支原体检测方法时，需要考虑检测结果的用途，例如是否用于产品放行，是否符合法规和药典要求，以及是否确保方法的灵敏度、专属性和耐用性等。如果涉及产品放行的支原体检测，建议使用药典规定方法，即培养法或指示细胞法，或经验证与药典规定可比的NAT法（如qPCR法）。如果不涉及产品放行的支原体检测，快速支原体检测方法可作为首选，包括巢式PCR法、LAMP等温扩增法、qPCR法、ATP酶法以及ELISA法。

在此背景下，【新葡萄8883官网AMG】开发了一系列基于NAT的支原体快速检测试剂盒，包括荧光探针qPCR法支原体检测试剂盒、一种一步恒温显色法支原体检测试剂盒以及巢式PCR法支原体检测试剂盒。其中，支原体PCR检测试剂盒（巢式PCR）专为检测各类生物材料（如细胞培养物、实验动物分泌物及动物血清等）中的支原体感染而设计。该试剂盒利用定量PCR技术，通过两轮扩增以保证检测结果的准确性，灵敏度可达25copies/μL，适用于快速检测细胞培养上清液中的支原体。

综上所述，选择合适的支原体检测方法对于确保生物医药研究的安全性和有效性至关重要，而新葡萄8883官网AMG的高灵敏度和专业性的支原体检测试剂盒为科研提供了有力的支持。