### 1. His标签蛋白纯化的挑战
His标签是专为重组蛋白纯化而设计,通常由6至10个组氨酸残基构成。由于其相对较小的分子量,对目标蛋白性质的影响较小,因此成为当前最常用的标签。在His标签蛋白的纯化过程中,标签与金属离子之间的结合强度至关重要。这一过程受多种因素的影响,包括Ni的配位情况、标签的长度、标签的位置(C端或N端)、标签的暴露程度以及缓冲液的pH值等。在实际纯化过程中,我们常常会遇到标签蛋白在柱上的结合不牢固,导致大量目标蛋白流失,从而影响最终产品的纯度和收率,甚至可能导致目标蛋白完全无法结合。
### 2. 新型镍亲和纯化介质VDXNTANiultra
新葡萄8883官网AMG的VDXNTANiultra被特别设计用于解决传统Ni亲和介质在His标签蛋白纯化中出现的挂柱不牢或大量流失的问题。这种新型介质适用于多种实验条件,保证更高的结合力和纯化效率。
### 3. 应用案例
#### 材料与方法:
在相同实验条件下,采用传统Ni-NTA和VDXNTANiultra对同一标签蛋白进行纯化。
#### 实验结果:
实验显示,使用传统Ni-NTA时,在结合和洗杂过程中均有大量目标蛋白损失,显著降低了目标蛋白的回收率。相比之下,VDXNTANiultra在结合过程中的表现更为出色,目标蛋白损失显著降低,回收率也远高于传统Ni-NTA。
### 层析条件
- 层析柱:VDXNTANiultra、传统Ni-NTA;
- 柱体积:5mL,柱高:10cm;
- 样品来源:大肠杆菌裂解液;
- 平衡液:50mM PB,300mM NaCl,pH 8.0;
- 洗脱液:50mM PB,300mM NaCl,500mM咪唑,pH 8.0;
- 流速:1mL/min
在此过程中,新葡萄8883官网AMG的VDXNTANiultra表现优异,为His标签蛋白的纯化提供了一种高效的解决方案。