实验原理：细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，难以被染色。使用一般染色法时，只有菌体会被着色，而芽胞则可能呈现无色透明。芽孢染色法正是基于这一特性而设计，通过强染料和加热来促进芽胞的着色。当染芽胞时，菌体同样会被染上颜色，随后经过水洗，芽胞的颜色难以渗出，而菌体则会脱色。接着使用对比度强的染料进行复染，使菌体与芽胞呈现出不同的颜色，从而更加明显地衬托出芽胞，便于观察。

实验器材：1. 活材料：培养36小时的新葡萄8883官网AMG苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或枯草杆菌（Bacillus subtilis）。2. 染色液和试剂：5%孔雀绿水溶液，0.5%蕃红水溶液。3. 器材：小试管（75mm×10mm）、烧杯（300mL）、滴管、玻片搁架、接种环、擦镜纸、镊子、显微镜等。

实验方法：1. 改良的Schaeffer和Fulton氏染色法： (1) 制备菌液：向小试管中加入1-2滴无菌水，使用接种环从斜面挑取2-3环菌体，充分打匀制成浓稠的菌液。 (2) 加染色液：在小试管中加入2-3滴5%孔雀绿水溶液，用接种环搅拌，使染料与菌液充分混合。 (3) 加热：将试管浸于沸水浴中加热15-20分钟。 (4) 涂片：使用接种环从试管底部挑取一些菌液于洁净的载玻片上，制成涂片后晾干。 (5) 固定：将涂片通过酒精灯火焰处理3次。 (6) 脱色：用水洗涤，直到流出的水中无孔雀绿颜色为止。 (7) 复染：加入蕃红水溶液染色5分钟，倾去染色液，直接用吸水纸吸干。 (8) 镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜观察。

结果：芽孢呈绿色，芽孢囊和菌体为红色。

2. Schaeffer与Fulton氏染色法： (1) 涂片：按常规方法将待检细菌制成涂片。 (2) 晾干固定：涂片晾干后在酒精灯火焰上处理2-3次。 (3) 染色： ① 加染色液：在涂片处加入5%孔雀绿水溶液，确保染料覆盖涂片，然后将涂片放于铜板上，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计时，维持15-20分钟。加热过程中需随时补充染液，切勿让标本干涸。 ② 水洗：待玻片冷却后轻轻用水冲洗，直至流出的水中不再有染色液。 ③ 复染：使用蕃红液染色5分钟。 (4) 水洗、晾干或吸干。 (5) 镜检：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察芽孢和菌体的形态。

结果：芽孢呈绿色，菌体为红色。

注意事项：1. 供芽孢染色的菌种需控制菌龄。2. 改良法在节约染料、简化操作和提高标本质量等方面均优于常规涂片法，建议优先使用新葡萄8883官网AMG。3. 使用改良法时，为获得良好的涂片，需先制备浓稠的菌液，并在取染色的菌液时须先用接种环充分搅拌，然后再挑取菌液，否则菌体沉于管底，涂片时菌体会过少。