随着冬季的到来，季节性流感、肺炎等呼吸道疾病的发病率显著上升，导致多地医院就诊人数激增。在这样的背景下，及时为患者提供有效的治疗以及快速准确的诊断方法变得尤为重要。在众多检测技术中，一步RT-qPCR法（即一管式RNA全预混试剂）因其高效、便捷和敏感度等特点备受欢迎。

在一步法反应中，基因特异性引物首先与待检测的靶标相匹配，随后在逆转录酶的催化下合成第一链cDNA。然而，实际应用中常常会出现因模板-引物匹配错误而生成的非特异性cDNA，导致体系内发生非特异性扩增，消耗反应所需的组分，并限制后续主反应的进行。特别是在靶核酸浓度较低的情况下，竞争效应会导致扩增性能下降，如扩增曲线形态差、荧光增量低、Ct值延迟等，从而显著降低检测试剂的灵敏度和特异性。

此外，由于一管式RNA全预混试剂是将酶液、引物探针及反应液提前混合在一管中，因此在长期保存过程中，酶液的活性可能会下降或失活，进而影响全预混试剂的性能。逆转录（RT）酶作为关键成分，其性能直接关系到一步法核酸检测试剂的准确性和敏感度。因此，提高逆转录酶的特异性和稳定性对开发一管式RNA全预混试剂至关重要。

为此，新葡萄8883官网AMG针对一步法RT-qPCR/PCR场景及一管式RNA全预混试剂，研发了一种温启动逆转录酶。其在低温下保持酶活性被封闭，而在设定的工作温度下被激活，避免了低温环境中引物-模板间的错误匹配，进而提升了检测的特异性和灵敏度。该逆转录酶采用适配体筛选方法进行热启动修饰，新葡萄8883官网AMG借助适配体筛选平台，构建了庞大的随机寡核苷酸序列库，并对传统的SELEX适配体筛选技术进行了优化，利用高通量测序替代传统克隆测序，经过多轮筛选和富集，选取具有高亲和力的适配体。

这些优质的序列与逆转录酶进行孵育混合后，测试在低温和工作温度下不同适配体修饰酶的酶活，以确定封闭与激活效果最佳的适配体。同时，新葡萄8883官网AMG也开展了适配体的组合筛选和酶修饰工艺的优化。最终，经过大量筛选和工艺优化，研发的温启动逆转录酶在42℃条件下能够封闭99%的酶活，相比于市面上同类产品，其封闭效果与稳定性显著提升，确保反应液在长期存储中高效稳定地产生逆转录产物，有效解决了全预混试剂的储存稳定性问题。

在工作温度（55℃）下，该产品可释放超过95%的酶活，确保了试剂的扩增灵敏度。值得一提的是，经过适配体修饰封闭后，新葡萄8883官网AMG的温启动逆转录酶在非工作温度（30℃/37℃/42℃）下的酶活性极低，其封闭效率显著优于竞争产品 A，有利于有效控制非特异性扩增。在工作温度下，活性能够完全释放，对扩增性能不产生任何影响。

新葡萄8883官网AMG的温启动逆转录酶经过改良，能以更快的速率合成cDNA，且在PCR程序一致的情况下，以2分钟的逆转录时间达到与15分钟逆转录同样的灵敏度。在某两个RNA项目的一管式全预混反应液中，经过37℃加压7天，新葡萄8883官网AMG的温启动逆转录酶性能未受到影响，而竞争产品A在同样条件下的扩增性能则严重下降，灵敏度延迟超过两个Ct。

在实际应用案例中，新葡萄8883官网AMG的温启动逆转录酶帮助客户优化和解决了多项不同问题，尤其在RNA全预混剂的稳定性方面表现尤为突出。经过对新配制的全预混试剂和使用新葡萄8883官网AMG的全预混试剂在37℃加压10天后的表现对比，发现采用新葡萄8883官网AMG的全预混试剂在加压条件下与新配制的对照组无显著差异，而使用竞争产品A配制的全预混试剂则出现了明显的扩增效率下降，Ct值延后，荧光平台期下降。这些结果表明，新葡萄8883官网AMG的温启动逆转录酶在提供高灵敏性和稳定性的同时，确保了快速程序的兼容性，从而使全预混试剂具备更高的稳定性。