**多克隆抗体与单克隆抗体的比较**

多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）是通过对一种包含多种抗原决定簇的抗原进行免疫刺激，促使机体产生不同B细胞克隆，从而产生针对多种抗原表位的抗体。而单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）则是由单一B细胞克隆生成，专一性高，仅针对特定抗原表位。单克隆抗体的制备通常采用杂交瘤技术，它的核心是通过细胞融合技术将能分泌抗体的致敏B细胞与具备无限繁殖能力的骨髓瘤细胞进行融合，生成B细胞杂交瘤。

**单克隆抗体与多克隆抗体的优缺点**

多克隆抗体具有以下优点：

• 能够放大低表达水平的靶蛋白信号。
• 能识别多个抗原表位。
• 对抗原中的微小变化具有较好的容许度。
• 能够识别与免疫原蛋白有高同源性的蛋白质，或从非免疫原物种样品中筛选靶蛋白。
• 通常是检测变性蛋白质的首选工具。
• 多表位的特点可以提供更强的检测结果。

然而，多克隆抗体也存在一些缺点：

• 易于在不同批次间产生差异。
• 可能产生大量非特异性抗体，导致背景信号问题。
• 不适合用于探测抗原的特定结构域，因为抗血清通常能够识别多个结构域。

单克隆抗体的优点包括：

• 一旦制备成功，就成为恒定的再生源，所有批次相同。
• 背景染色较低，适合细胞染色和切片分析。
• 具有高特异性，适合用作分析测定的一抗或组织中抗原的检测。
• 同质性极高，能高效结合混合物中的抗原。

但单克隆抗体也有缺点：

• 尽管可产生大量特异性抗体，但可能特异性过强而失去灵活性。
• 在抗原经化学处理后，比多克隆抗体更容易丢失表位，需使用多个单克隆抗体进行补偿。

**抗体的选择依据**

当对抗体的特异性要求高、用量较大或需长期使用一致性抗体，且应用要求多样（如WB/IP/IF/ICC等），可选择单克隆抗体。而多克隆抗体的特异性相对较差，不同批次间可能存在差异，因此其在特异性和一致性方面有局限性。在使用多克隆抗体进行免疫检测时，常遇到背景过深或杂带问题。尽管存在交叉反应，但由于多克隆抗体可识别多个抗原表位，即使有少数抗原表位破坏或抗原构象改变，实验结果通常仍不受影响。对于免疫原制备困难的情况，建议选择单克隆抗体。

若抗体特异性要求不高，仅需进行沉淀、凝集反应的实验，或只需进行ELISA检测，可考虑制备多克隆抗体。多克隆抗体的制备时间短、成本相对低廉，在某些情况下具备良好的选择性。此外，在相同实验条件下，使用多克隆抗体可以提高检测灵敏度，更易于检出丰度较低的蛋白。

**抗原的选择**

在抗体制备中，抗原的选择可以为天然蛋白、重组可溶性蛋白、重组变性蛋白或多肽，抗原质量越高，最终制备高质量抗体的几率将越大。目前，重组蛋白或多肽常被作为抗原使用。重组蛋白作为抗原时，通常含有更多的抗原决定簇，既包含空间表位，也有线性序列表位，从而对机体免疫刺激更充分，因此获取应用广泛的抗体几率较高。尤其在针对已知存在修饰或复杂结构的目的蛋白时，重组蛋白更是优先选择。

当然，在有些情况下，必须通过多肽制备抗体，特别是当需要针对同源家族中特定蛋白时，需合成具特异性的AA多肽。此外，一些修改过的抗体可在多肽合成阶段进行定点修饰某些AA以制备特定抗体。

在选择抗原多肽时，通常遵循以下原则：

• 尽可能选择位于蛋白表面的序列。
• 确保所选序列不形成α-螺旋结构。
• N端和C端的肽段通常比中间肽段更优越。
• 避免选择内部重复或接近重复的序列。
• 避免选择同源性过高的肽段。
• 在N端和C端进行交联，选择在对产生抗体影响不大的部分交联。
• 序列中应避免过多的脯氨酸（Pro），但适当保留1至2个Pro，有助于增强肽链结构的稳定性，对特异性抗体产生有益。

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