新葡萄8883官网AMG提供的人前列腺癌细胞VCAP培养说明书，详细阐述了细胞培养的重要参数与操作步骤，确保您的细胞培养高效、顺利。

一、细胞培养条件

细胞名称：人前列腺癌细胞VCAP
生长特性：贴壁
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：DMEM（含NaHCO3 15g/L） + 10% FBS + 1% P/S

二、细胞处理方法

收货后，建议将细胞培养至良好状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口，以保持运输细胞的最佳状态。在收到细胞后，需用75%酒精喷洒消毒整个细胞瓶，并于超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片将作为售后服务的重要依据，如未提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，将细胞培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养。如细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其带回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，去除上清后用1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次。接下来，添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，待其变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打脱落的细胞后转移到15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。弃去上清后，加入1ml 新葡萄8883官网AMG 无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需要转入液氮罐，则应先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。将细胞转移至含5ml完整培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，并在37℃，5% CO2细胞培养箱中培养。次日更换成新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如脱离较多，建议将所有培养液收集至离心管中，再进行后续处理。加入胰酶后轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应，再离心并重悬。按1:2比例进行分瓶传代，确保培养基充分补充，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题的重发情况及判定标准：
   1. 运输过程中遇到的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏，支持重发。
   2. 收到产品48小时内证明细胞污染问题，核实后可重发。
   3. 常温发货的细胞如复苏后未存活，需提供细胞状态照片，支持重发。
   4. 如干冰冻存发货的细胞复苏后出现污染，支持重发。
   5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供实验结果，经核实后重发。
   6. 首次接收细胞时请拍照，以便售后核查。未告知视为产品合格。
2. 不予重发的情况包括：
   1. 客户造成的细胞污染。
   2. 不正确操作导致细胞状态不佳。
   3. 非推荐细胞培养体系导致的细胞状态问题。
   4. 未提供细胞培养前3天的照片。
   5. 接受细胞后2天内未告知任何问题。
   6. 具体情况另行决定。

以上是新葡萄8883官网AMG关于人前列腺癌细胞VCAP的培养注意事项与相关条款，务必仔细阅读以确保培养顺利进行。