背景介绍：裸露的RNA是一种带负电荷的亲水性大分子，因细胞膜的静电排斥而难以进入细胞，同时易受到普遍存在的RNA酶的快速降解。因此，为了有效传递RNA，必须使用保护性的外壳。细胞膜主要由脂质构成，采用脂质囊泡包裹RNA可以帮助其穿透细胞膜，并能将RNA释放到细胞质中。所用的囊泡应为带正电的脂质，以便与带负电的RNA结合。然而，含有永久性阳离子脂质的囊泡可能因与带负电的细胞膜发生静电作用而造成细胞毒性，而脂质结构则能够响应内体酸性环境而转变为带正电荷的分子。

脂质纳米粒（LNP）结构通常由四种关键成分构成：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）、胆固醇和PEG化脂质。这些成分的组合使得LNP在RNA传递中发挥重要作用。LNP的传递机制涉及多个步骤，确保mRNA能够安全且有效地送达目标细胞并进行蛋白表达。在LNP中，可电离的阳离子脂质起着至关重要的作用，它能够在自组装成LNP时带正电荷，从而载入带负电的RNA；在中性pH条件下，它不带电以减少毒性，在细胞吸收后则重新带正电以促进内体逃逸，随内体pH的降低而变化。

胆固醇和PEG脂质的变体已被证实能调节LNP的物理特性、纳米结构及最终效果，而磷脂则通常称为“辅助脂质”。LNP不仅能够保护mRNA，还能促进其细胞内传递，并激活免疫反应。

转染实验步骤：下述转染程序适用于6孔板的单孔参考条件，其他培养形式请参考表1。

1. mRNA预混液制备：将25μg mRNA（浓度为1μg/μL）与60μL缓冲液混合。
2. mRNA-easyLNP复合物：将625μL mRNA预混液与625μL easyLNP纳米混悬液混合，轻轻涡旋2-3秒以确保均匀。
3. 加入细胞：将125μL mRNA-easyLNP复合物加入细胞中，轻轻晃动以确保均匀分散。
4. 分析时间：培养24-48小时后进行分析。

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表1：根据每孔细胞培养容器的mRNA转染指南。

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