一、实验准备：新葡萄8883官网AMG赖氨酰肽链内切酶125-05061

二、赖氨酰肽链内切酶单位的定义

酰胺酶单位定义为在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺的酶量。计算公式为： AU/vial = [(a-b)/25] × (1/962) × (40/01)
其中，a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、实验操作流程

在实验中，为防止任何蛋白被捕获，使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管。接下来，利用质谱分析用的凝胶染色试剂盒进行实验，包括银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）。
具体步骤如下：

1. 电泳分离蛋白质样品。
2. 从凝胶中切割蛋白质片段并放入微量离心管。
3. 使凝胶脱色（可使用质谱分析用的凝胶染色试剂盒中的脱色溶液）。
4. 向试管中加入300μL的乙腈并搅拌30分钟。
5. 去除乙腈后，用Parafilm膜覆盖微量离心管。
6. 在Parafilm膜上打出针孔，并进行真空干燥15分钟。
7. 将100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，在56℃下保持1小时。
8. 室温冷却后，加入等量的50mM碘胺，置于暗处在45℃下恒温并涡旋45分钟。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵对凝胶片段进行膨胀处理15分钟。
12. 用300μL乙腈再次干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除液相，真空干燥凝胶片段15分钟。
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中膨胀凝胶片段45分钟。（赖氨酸内切酶需稀释于50mmol/L Tris-HCl pH 8.5 中）
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，并将凝胶片段放置在37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5 中过夜。
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，并在20分钟内振荡凝胶片段，进行三次抽提多肽。
17. 加入5%甲酸/50%乙腈并在20分钟内振荡凝胶片段，再次进行三次抽提多肽。
18. 如有需要，可使用SpeedVac浓缩多肽。
19. 用ZipTip进行脱盐和纯化多肽。
20. 如有需要，可将多肽用弱真空浓缩至2μL。
21. 最后加入基质进行质谱分析。

四、购买渠道

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