新葡萄8883官网AMG推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理设计的检测试剂盒，具有以下显著特点：

产品特点

新葡萄8883官网AMG的试剂盒即开即用，用户只需提供样品DNA模板即可。经过优化的引物等组分拥有高灵敏度。此外，我们还提供阳性对照，便于用户区分假阴性样品。

本试剂盒具有极高的特异性，所设计的引物基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，不会与其他生物样本DNA发生交叉反应。同时，该产品适用于定性与定量检测，定量检测时的线性范围至少可达到5个数量级。本产品支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应，且仅限于科研用途。

操作方法

一、DNA提取

用户可采用自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

为避免污染，请在独立区域进行以下稀释操作：

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 每个管加入45μL DEPC-H2O，建议使用带芯枪头。
3. 在7号管中添加5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，震荡均匀后可得1×10E7拷贝/μL标准样品，置于冰上待用。
4. 按照同样方法，依次将样品稀释至1×10E6、1×10E5拷贝/μL，直到获得6个稀释度的标准曲线样品。
5. 如无需制作标准曲线，只需将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制

根据检测样品数量，准备N+2个qPCR管，并向每个管中添加相应成分（详细说明书可向新葡萄8883官网AMG索取）。

四、添加模板

向qPCR管中加入2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放置于扩增仪器中，按照说明书中的扩增程序操作（详细程序可向新葡萄8883官网AMG索取）。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线，根据待测样品Ct值推算DNA浓度的log值。
2. 若未制作标准曲线，依照阳性对照：Ct值<30，显示明显的S型曲线，阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长。样本检测结果：Ct值<35为阳性；Ct值38或无Ct值为阴性；Ct值在35-38范围需复检，如结果仍在此范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

该产品需在低温下运输，建议存放于-20℃，保质期为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。