编者按：近年来，斑马鱼Crispant技术在基因编辑领域取得了显著突破，其高效性、低成本和易操作性使其成为研究疾病机制、药物筛选和功能基因组学的理想工具。未来，该技术有望在精准治疗上展现更大的潜力。Crispant通过CRISPR/Cas9技术实现，对Cas9蛋白和靶点gRNA进行混合（RNP）注射到斑马鱼的1细胞期，获得具有整体敲降效果的F0代敲除嵌合体斑马鱼，直接用于表型观察和基因功能研究。

相较于传统的m啡啉介导基因敲降技术，Crispant具有显著优势：

• 01、研究周期短：最快可在2周内观察到胚胎期表型，通常4周内能提供包括靶点效率验证的完整研究报告。
• 02、可在斑马鱼发育的任何阶段观察表型：由于m啡啉随着胚胎的发育而逐渐降低其效果，其通常仅限于1周内观察表型；而Crispant则可在基因组层面进行基因编辑，生成持续有效的基因敲降效应，允许对表型进行长期观察。
• 03、毒副作用低：m啡啉可能导致不良反应，生成非特异性表型，通常需要合成两个相互佐证的m啡啉以提高可信度；而Crispant体系设计简单，能够高效筛选多个特异性靶点，实现共同注射多个靶点以达到基因完全敲除的效果。
• 04、可同时敲降多个目的基因：斑马鱼中常存在多个目的基因的亚型，Crispant可以针对多个基因展开敲降，且减少了非特异性表型的产生。
• 05、便于稳定品系的构建：通过Crispant筛选出的靶点，能够直接用于稳定敲除斑马鱼品系的构建，从而节省时间和成本。

应用场景方面，Crispant技术通过多重sgRNA协同编辑和F0代表型直筛，大幅缩短了基因功能研究的周期，至传统方法的1/5，且大幅降低50%的成本。这些优势使得Crispant成为疾病模型构建、基因功能解析及药物筛选的首选技术。

01 疾病模型构建

已有研究利用Crispant技术构建癫痫模型，通过敲除irf2bpl或cars2基因模拟患者抽搐表型，以用于抗癫痫药物如丙戊酸的筛选。此外，Crispant也应用于凝血障碍模型构建，敲除adcyap1b基因导致凝血因子下调，并表现出自发性出血，适合于抗血栓药物的评价。

02 基因功能解析

有研究通过敲除kctd10基因诱导心脏线性畸形，推动心脏发育的研究；另有通过rfx6敲除诱发糖尿病样表型，以探讨胰腺功能。

03 药物筛选

已用Crispant技术通过敲除斑马鱼的cars2、Sigirr、cbsb基因等诱导相关表型，用于神经系统疾病、抗感染与免疫调节、代谢与罕见病及肿瘤个性化等领域的药物筛选。

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