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人喉癌淋巴结转移细胞与新葡萄8883官网AMG的研究

发布时间:2025-07-22   信息来源:尊龙凯时官方编辑

新葡萄8883官网AMG的细胞培养条件包括:气相组合为95%空气与5%二氧化碳,培养温度设定为37℃。在细胞传代方面,首次建议进行1:2的比例传代,传代操作可在两天后更换培养液。为了获得最优质的细胞,建议客户同时购买培养液,以享受极好的优惠。

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在收到细胞后,务必处理至良好状态,然后充满完全培养液并密封瓶口,这是运输细胞的最佳方式。处理步骤为:用75%的酒精喷洒整个细胞瓶消毒,接着放入超净工作台内进行严格的无菌操作。随后,将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3至4小时,以确保细胞状态稳定后再进行后续操作。建议在显微镜下观察细胞的生长情况,并用不同的倍数拍照保存(最好为40x, 100x, 200x各一张),前三天的照片是重要的售后依据,如未提供照片,则视为收货状态良好。

新葡萄8883官网AMG的细胞培养步骤如下:

a. 细胞传代:如果细胞未超过80%的汇合度,需将瓶装的完全培养液收集至离心管中,保留5ml完全培养基,并继续在37℃、5% CO2的环境中培养。若细胞密度超过80%,则可进行传代培养。贴壁细胞的传代步骤为:1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次;2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,放入37℃培养箱中消化1-2分钟,观察消化情况,当细胞大部分变圆并脱落后,迅速操作,轻敲培养瓶并加入5ml完全培养基以终止消化;3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,以1000RPM离心5分钟,弃去上清液并用1-2ml完全培养基重悬;4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至每瓶5-8ml,并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代的步骤如下:1. 半换液法:竖着培养瓶在培养箱中静置1小时,轻轻吸掉约3ml的培养基并补充3ml新的完全培养基;如培养基变色缓慢,可直接加入约500μl的FBS;在传代时可直接补给5ml培养基,并一般在传代3次后进行离心传代,去掉死细胞;2. 离心换液法:如需分瓶,可将细胞悬液收集至离心管中,以1000RPM离心5分钟,弃去上清,补加1-2ml培养液后重悬混匀,再将细胞悬液以1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml的新完全培养基以维持细胞的生长活力,后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

b. 细胞冻存:1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃去T25培养瓶中的培养液,并用PBS清洗细胞一次;2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,查看细胞是否回缩变圆,待此情况发生后立即加入5ml完全培养液终止消化,并轻轻吹打使细胞脱落,再将悬液转移至15ml离心管中,以1000RPM离心5分钟;3. 弃去上清,向沉淀的细胞中加入1ml的无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转入冻存管中;4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中,若后期需转入液氮罐,则需在-80℃存放至少24小时再进行转移。

c. 细胞复苏:1. 从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),迅速置入37℃水浴中解冻,直至没有结晶;然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,以1000RPM离心5分钟;3. 弃去上清,向沉淀细胞加入5ml完全培养基重悬,并接种至T25培养瓶,放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养;4. 第二天,换用新鲜的完全培养基以维持细胞的生长。

注意事项:部分细胞可能在运输过程中由于贴壁不牢而发生细胞脱落,这是正常现象。如如果观察到细胞脱落较多,请将培养瓶内的培养液收集至离心管中,进行1000RPM离心5分钟,将上清液用于过渡培养,以后再进行对比培养。沉淀中加入1-2ml胰酶轻轻吹打重悬,消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。随后再次离心,弃去上清,加入1-2ml完全培养基重悬,最后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至每瓶5-8ml,放入37℃、5% CO2细胞培养箱进行培养。